Baru-baru ini, metode yang andal, sangat sensitif dan cepat untuk mendiagnosis berbagai penyakit menular pada manusia telah dikembangkan. Metode ini disebut "analisis PCR". Apa itu, apa esensinya, mikroorganisme apa yang bisa diungkapnya dan bagaimana cara mengambilnya dengan benar, akan kami ceritakan di artikel kami.
Riwayat penemuan
Metode reaksi berantai polimerase (PCR) diciptakan oleh ilmuwan Amerika Kary Mullis pada tahun 1983. Awalnya, metode diagnostik dipatenkan oleh Cetus Corporation, tempat penciptanya bekerja. Namun pada tahun 1992, semua hak dan paten dijual kepada Hoffman-La Roche. Setelah itu, ternyata penelitian serupa dilakukan secara paralel dan dicatat oleh ahli biologi Amerika lainnya, seperti Alice Chen, David Edgar, John Trell. Pada tahun 1980, ilmuwan Soviet A. Slyusarenko, A. Kaledin dan S. Gorodetsky juga menangani masalah ini. Oleh karena itu, tidak mungkin untuk menentukan satu-satunya pemegang hak cipta. Banyak ahli biokimia terkemuka telah memberikan kontribusi tertentu untuk pengembangan teknik reaksi berantai polimerase dan telah mematenkan inovasi mereka. Saat ini, analisisPCR dilakukan di mana-mana di laboratorium yang dilengkapi secara khusus.
Inti dari metode diagnostik PCR
Analisis PCR: apa itu dan bagaimana cara kerjanya? Inti dari metode ini adalah untuk meningkatkan volume lingkungan mikroba tertentu di bawah kondisi buatan menggunakan enzim DNA polimerase khusus. Untuk ini, materi DNA yang ada dikalikan berkali-kali. Jadi, dengan adanya mikroorganisme patogen dalam sampel, jumlahnya akan meningkat karena manipulasi laboratorium biokimia, dan tidak akan sulit untuk mendeteksi bakteri di bawah mikroskop.
Bagaimana penelitian material dilakukan?
Diperlukan untuk analisis:
- Matriks DNA;
- primer menghubungkan ujung-ujung bahan;
- enzim DNA polimerase tahan panas;
- bahan kimia yang membuat enzim bekerja dengan baik;
- larutan buffer diperlukan untuk menciptakan kondisi yang sesuai untuk pertumbuhan dan perkembangan materi DNA.
Untuk melakukan PCR dilakukan 25-30 kali pengulangan, terdiri dari tiga tahap: denaturasi, annealing dan elongasi.
Untuk analisis reaksi berantai polimer, perangkat khusus digunakan - penguat. Peralatan modern memungkinkan Anda untuk mengatur program yang diperlukan untuk memanaskan dan mendinginkan tabung untuk menghilangkan kesalahan selama diagnosa.
Di mana diagnostik digunakan?
Metode reaksi berantai polimer digunakan di berbagai bidang kedokteran:
- kriminal denganitu mengidentifikasi materi genetik seperti rambut, air liur atau darah;
- Tes darah PCR membantu genotipe, misalnya, untuk mendeteksi reaksi bawaan individu terhadap obat tertentu;
- menggunakan metode ini untuk menetapkan adanya ikatan keluarga di antara orang-orang;
- Metode PCR paling populer telah menjadi diagnostik medis untuk menentukan berbagai penyakit menular.
Infeksi apa yang dideteksi PCR?
Jadi, kedokteran telah lama dan berhasil menggunakan analisis PCR. Apa itu, kita sudah tahu. Dan patogen apa yang dapat dideteksi dengannya? Berikut penyakit menular yang didiagnosis dengan metode PCR:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplasmosis;
- kandidiasis;
- klamidia;
- mikoplasmosis;
- gardnerellosis;
- mononukleosis menular;
- trikomoniasis;
- infeksi papillomavirus;
- tuberkulosis;
- infeksi herpes tipe 1 dan 2;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovirus;
- difteri;
- salmonellosis;
- infeksi HIV.
Juga, metode PCR digunakan dalam diagnosis kanker.
Manfaat metode
Diagnosis PCR memiliki beberapa keunggulan:
- Sensitivitas tinggi. Bahkan dengan adanya hanya beberapa molekul DNA mikroorganisme, analisis PCR menentukan adanya infeksi. Metode ini akan membantu penyakit kronis dan penyakit yang muncul secara laten. Seringkali dalam kasus seperti itu, mikroorganismesebaliknya tidak dapat ditanami.
- Material apapun cocok untuk penelitian, seperti air liur, darah, sekret kelamin, rambut, sel epitel. Yang paling umum adalah analisis darah dan apusan urogenital untuk PCR.
- Tidak perlu panen jangka panjang. Proses diagnostik otomatis memungkinkan Anda mendapatkan hasil pemeriksaan setelah 4-5 jam.
- Metode ini hampir 100% dapat diandalkan. Hanya kasus terisolasi dari hasil negatif palsu yang telah dicatat.
- Kemampuan untuk mengidentifikasi beberapa jenis patogen dari satu sampel bahan. Ini tidak hanya mempercepat proses diagnosis penyakit, tetapi juga secara signifikan mengurangi biaya material. Seringkali dokter meresepkan analisis PCR yang komprehensif. Harga pemeriksaan, yang terdiri dari penentuan enam patogen, adalah sekitar 1.500 rubel.
Rekomendasi untuk mempersiapkan analisis
Agar hasilnya dapat diandalkan selama studi PCR, Anda perlu mengikuti tes, mengikuti rekomendasi untuk persiapan awal diagnosis:
- Sebelum mendonorkan air liur, sebaiknya hindari makan dan minum obat 4 jam sebelum pengambilan sampel. Segera sebelum prosedur, bilas mulut Anda dengan air matang.
- Aturan di atas juga harus diikuti saat mengambil sampel dari permukaan bagian dalam pipi. Setelah dibilas, disarankan untuk melakukan pijatan ringan pada kulit untuk menonjolkan sekresi kelenjar.
- Urine biasanya dikumpulkan di rumah. Untuk melakukan ini, Anda perlu melakukan toilet menyeluruhalat kelamin. Kumpulkan 50-60 ml urin dalam wadah plastik steril. Untuk menjaga kemurnian bahan, dianjurkan bagi wanita untuk memasukkan tampon ke dalam vagina, dan bagi pria untuk menarik lipatan kulit sebanyak mungkin. Jangan berdonasi saat haid.
- Untuk mendonorkan sperma, Anda harus menahan diri dari hubungan seksual selama 3 hari sebelum pengambilan sampel. Dokter juga menyarankan untuk tidak mengunjungi sauna dan mandi air panas, minum alkohol dan makanan pedas. Anda harus menahan diri dari buang air kecil 3 jam sebelum tes.
- Untuk mengambil apusan urogenital, misalnya jika tes PCR dilakukan untuk klamidia, baik wanita maupun pria disarankan untuk melakukan istirahat seksual selama 3 hari. Obat antibakteri tidak boleh diminum 2 minggu sebelum analisis. Selama seminggu, Anda harus berhenti menggunakan gel intim, salep, supositoria vagina, douching. 3 jam sebelum pemeriksaan, Anda harus menahan diri dari buang air kecil. Pada saat haid tidak dilakukan pengambilan sampel, hanya 3 hari setelah berhentinya keluarnya darah, sudah dapat dilakukan pemeriksaan apus urogenital.
PCR selama kehamilan
Selama masa penantian bayi, banyak infeksi menular seksual yang sangat berbahaya bagi perkembangan normal janin. PMS dapat memicu keterbelakangan pertumbuhan intrauterin, keguguran atau kelahiran prematur, malformasi kongenital anak. Oleh karena itu, sangat penting untuk menjalani pemeriksaan PCR pada awal kehamilan. Diperlukan untuk lulus analisis saat pendaftaran - hingga 12 minggu.
Materi diambil dari saluran serviks menggunakan sikat khusus. Prosedur ini tidak menimbulkan rasa sakit dan tidak menimbulkan bahaya bagi bayi. Biasanya selama kehamilan, analisis dilakukan untuk klamidia dengan metode PCR, serta untuk ureaplasmosis, mikoplasmosis, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Kompleks pemeriksaan seperti itu disebut PCR-6.
PCR untuk diagnosis HIV
Karena fakta bahwa metode reaksi berantai polimerase sangat sensitif terhadap perubahan dalam tubuh dan kondisi diagnosis, banyak faktor yang dapat mempengaruhi hasil. Oleh karena itu, analisis PCR untuk infeksi HIV bukanlah metode yang dapat diandalkan, efisiensinya adalah 96-98%. Dalam 2-4% kasus yang tersisa, tes memberikan hasil positif palsu.
Tetapi dalam beberapa situasi, diagnostik PCR HIV sangat diperlukan. Biasanya diberikan kepada orang dengan hasil ELISA negatif palsu. Indikator tersebut menunjukkan bahwa seseorang belum mengembangkan antibodi terhadap virus dan mereka tidak dapat dideteksi tanpa peningkatan jumlah yang berlipat ganda. Inilah tepatnya yang dapat dicapai dengan melakukan tes darah PCR.
Diagnosis ini juga diperlukan untuk anak-anak di tahun pertama kehidupan yang lahir dari ibu HIV-positif. Metode ini adalah satu-satunya cara untuk menentukan status anak secara andal.
PCR untuk mendiagnosis hepatitis
Metode reaksi berantai polimerase memungkinkan pendeteksian DNA virus hepatitis A, B, C jauh sebelum pembentukan antibodi terhadap infeksi atau timbulnya gejala penyakit. Analisis PCR untuk hepatitis C sangat efektif, karena pada 85% kasus penyakit ini tidak menunjukkan gejala dan tanpa gejalapengobatan tepat waktu memasuki tahap kronis.
Deteksi patogen tepat waktu akan membantu menghindari komplikasi dan pengobatan jangka panjang.
Pemeriksaan PCR Komprehensif
Analisis PCR Kompleks: apa itu? Pemeriksaan ini menggunakan metode polymeric chain reaction, yang meliputi penentuan beberapa jenis infeksi secara bersamaan: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes tipe 1 dan 2, gonore, papillomavirus. Harga diagnostik semacam itu berkisar antara 2000 hingga 3500 rubel. tergantung pada klinik, bahan dan peralatan yang digunakan, serta pada jenis analisis: kualitatif atau kuantitatif. Apa yang diperlukan dalam kasus Anda - dokter akan memutuskan. Dalam beberapa kasus, cukup hanya untuk menentukan keberadaan patogen, dalam kasus lain, misalnya, dengan infeksi HIV, titer kuantitatif memainkan peran penting. Saat mendiagnosis semua patogen di atas, pemeriksaannya disebut "analisis PCR-12".
Transkrip hasil analisis
Menguraikan analisis PCR tidaklah sulit. Hanya ada 2 skala indikator - "hasil positif" dan "hasil negatif". Ketika patogen terdeteksi, dokter dapat mengkonfirmasi keberadaan penyakit dengan kepastian 99% dan mulai merawat pasien. Dengan metode kuantitatif untuk menentukan infeksi, kolom yang sesuai akan menunjukkan indikator numerik dari bakteri yang terdeteksi. Hanya dokter yang dapat menentukan tingkat penyakit dan meresepkan pengobatan yang diperlukan.
Dalam beberapa kasus, misalnya, ketika menentukan infeksi HIV dengan PCR, dengan hasil negatif, perlu dilakukan pemeriksaan tambahan untuk mengkonfirmasi indikator yang diperoleh.
Di mana harus diuji?
Di mana melakukan tes PCR: di klinik umum atau di laboratorium swasta? Sayangnya, di institusi medis kota, peralatan dan metode sering ketinggalan zaman. Oleh karena itu, lebih baik memberikan preferensi ke laboratorium swasta dengan peralatan modern dan personel yang berkualifikasi tinggi. Selain itu, di klinik swasta, Anda akan mendapatkan hasil yang jauh lebih cepat.
Di Moskow, banyak laboratorium swasta menawarkan analisis PCR untuk berbagai infeksi. Misalnya, di klinik seperti Vita, Klinik Kompleks, Keluarga Bahagia, Uro-Pro, analisis PCR dilakukan. Harga pemeriksaan adalah dari 200 rubel. untuk mengidentifikasi satu patogen.
Dapat disimpulkan bahwa diagnosis penyakit menular dengan PCR dalam banyak kasus adalah cara yang cepat dan andal untuk mendeteksi patogen dalam tubuh pada tahap awal infeksi. Namun tetap saja, dalam kasus tertentu, ada baiknya memilih metode diagnostik lain. Hanya seorang spesialis yang dapat menentukan perlunya studi semacam itu. Menguraikan analisis PCR juga membutuhkan pendekatan profesional. Ikuti saran dokter Anda dan jangan melakukan tes yang tidak Anda perlukan.
