Diagnosis laboratorium dari hampir semua penyakit menular didasarkan pada deteksi antibodi dalam darah pasien, yang diproduksi melawan antigen patogen, dengan metode reaksi serologis. Mereka memasuki praktik medis dari akhir abad kesembilan belas hingga awal abad kedua puluh.
Perkembangan ilmu pengetahuan telah membantu menentukan struktur antigenik mikroba dan rumus kimia toksinnya. Ini memungkinkan untuk membuat tidak hanya terapi, tetapi juga serum diagnostik. Mereka diperoleh dengan memberikan patogen yang dilemahkan ke hewan laboratorium. Setelah beberapa hari terpapar, darah kelinci atau mencit digunakan untuk membuat preparat yang digunakan untuk mengidentifikasi mikroba atau toksinnya menggunakan uji serologis.
Manifestasi eksternal dari reaksi semacam itu tergantung pada kondisi pengaturannya dan pada keadaan antigen dalam darah pasien. Jika partikel mikroba tidak larut, mereka mengendap, melisiskan, mengikat atau melumpuhkan dalam serum. Jika antigen larut, maka muncul fenomena netralisasi atau pengendapan.
Reaksi aglutinasi (RA)
Tes aglutinasi serologis sangat spesifik. Sangat mudah untuk dilakukan dan cukupvisual, untuk mengetahui dengan cepat adanya antigen dalam serum darah pasien. Ini digunakan untuk menguji reaksi Vidal (diagnosis demam tifoid dan paratifoid) dan Weigl (demam tifoid).
Ini didasarkan pada interaksi spesifik antara antibodi manusia (atau aglutinin) dan sel mikroba (aglutenogen). Setelah interaksi mereka, partikel terbentuk yang mengendap. Ini adalah tanda positif. Agen mikroba hidup atau mati, jamur, protozoa, sel darah dan sel somatik dapat digunakan untuk mengatur reaksi.
Secara kimia, reaksi dibagi menjadi dua langkah:
- Koneksi spesifik antibodi (AT) dengan antigen (AG).
- Non-spesifik - pengendapan konglomerat AG-AT, yaitu pembentukan aglutinat.
Reaksi Aglutinasi Tidak Langsung (IPHA)
Reaksi ini lebih sensitif dari yang sebelumnya. Ini digunakan untuk mendiagnosis penyakit yang disebabkan oleh bakteri, parasit intraseluler, dan protozoa. Sangat spesifik sehingga konsentrasi antibodi yang sangat rendah pun dapat dideteksi.
Eritrosit domba yang dimurnikan dan sel darah merah manusia yang telah diolah sebelumnya dengan antibodi atau antigen digunakan untuk produksinya (tergantung pada apa yang ingin ditemukan oleh teknisi laboratorium). Dalam beberapa kasus, sel darah merah manusia diobati dengan imunoglobulin. Reaksi serologis eritrosit dianggap telah terjadi jika telah menetap di dasar tabung. Tentang reaksi positifkatakanlah ketika sel-sel diatur dalam bentuk payung terbalik, menempati seluruh bagian bawah. Reaksi negatif dihitung jika eritrosit mengendap di kolom atau berbentuk kancing di tengah bawah.
Reaksi Pengendapan (RP)
Reaksi serologis jenis ini digunakan untuk mendeteksi partikel antigen yang sangat kecil. Ini dapat berupa, misalnya, protein (atau bagiannya), senyawa protein dengan lipid atau karbohidrat, bagian dari bakteri, toksinnya.
Sera untuk reaksi diperoleh dengan menginfeksi hewan secara artifisial, biasanya kelinci. Dengan metode ini, Anda bisa mendapatkan serum pengental apa pun. Pengaturan reaksi presipitasi serologi serupa dalam mekanisme aksi untuk reaksi aglutinasi. Antibodi yang terkandung dalam serum bergabung dengan antigen dalam larutan koloid, membentuk molekul protein besar yang diendapkan di bagian bawah tabung atau pada substrat (gel). Metode ini dianggap sangat spesifik dan dapat mendeteksi zat dalam jumlah yang dapat diabaikan.
Digunakan untuk mendiagnosa wabah, tularemia, antraks, meningitis dan penyakit lainnya. Selain itu, ia terlibat dalam pemeriksaan medis forensik.
Reaksi pengendapan gel
Reaksi serologis dapat dilakukan tidak hanya dalam media cair, tetapi juga dalam gel agar. Ini disebut metode presipitasi difus. Dengan bantuannya, komposisi campuran antigenik kompleks dipelajari. Metode ini didasarkan pada kemotaksis antigen terhadap antibodi dan sebaliknya. Dalam gel mereka bergerakterhadap satu sama lain pada kecepatan yang berbeda dan, bertemu, membentuk garis presipitasi. Setiap baris adalah satu set AG-AT.
Reaksi netralisasi eksotoksin dengan antitoksin (PH)
Serum antitoksik mampu menetralkan aksi eksotoksin yang dihasilkan mikroorganisme. Reaksi serologis ini didasarkan pada ini. Mikrobiologi menggunakan metode ini untuk mentitrasi serum, toksin dan toksoid dan menentukan aktivitas terapeutiknya. Kekuatan netralisasi toksin ditentukan oleh unit konvensional - AE.
Selain itu, berkat reaksi ini, dimungkinkan untuk menentukan spesies atau jenis eksotoksin. Ini digunakan dalam diagnosis tetanus, difteri, botulisme. Penelitian dapat dilakukan baik "pada kaca" dan dalam gel.
Reaksi lisis (RL)
Serum kekebalan, yang masuk ke dalam tubuh pasien, selain fungsi utamanya sebagai kekebalan pasif, juga memiliki sifat melisiskan. Ia mampu melarutkan agen mikroba, elemen asing seluler dan virus yang masuk ke tubuh pasien. Tergantung pada spesifisitas antibodi yang termasuk dalam serum, bacteriolysins, cytolysins, spirochetolizins, hemolysins dan lainnya diisolasi.
Antibodi spesifik ini disebut "pelengkap". Hal ini ditemukan di hampir semua cairan tubuh manusia, memiliki struktur protein yang kompleks dan sangat sensitif terhadap kenaikan suhu, gemetar, asam dan sinar matahari langsung. Tetapi dalam keadaan kering ia mampu mempertahankansifat lisisnya hingga enam bulan.
Ada jenis reaksi serologis dari jenis ini:
- bakteriolisis;
- hemolisis.
Bakteriolisis dilakukan dengan menggunakan serum darah pasien dan serum imun spesifik dengan mikroba hidup. Jika komplemen cukup ada dalam darah, maka peneliti akan melihat bakteri lisis, dan reaksi akan dianggap positif.
Reaksi serologis kedua dari darah adalah bahwa suspensi sel darah merah pasien diobati dengan serum yang mengandung hemolisin, yang diaktifkan hanya dengan adanya pujian tertentu. Jika ada, maka asisten laboratorium mengamati pembubaran sel darah merah. Reaksi ini banyak digunakan dalam pengobatan modern untuk menentukan titer komplemen (yaitu, jumlah terkecil yang memicu lisis eritrosit) dalam serum darah dan untuk melakukan analisis fiksasi komplemen. Dengan cara inilah tes serologis untuk sifilis dilakukan - reaksi Wasserman.
Reaksi fiksasi komplemen (CFR)
Reaksi ini digunakan untuk mendeteksi antibodi terhadap agen infeksi dalam serum darah pasien, serta untuk mengidentifikasi patogen berdasarkan struktur antigeniknya.
Sampai saat ini, kami telah menjelaskan reaksi serologis sederhana. RSK dianggap sebagai reaksi kompleks, karena bukan dua, tetapi tiga elemen yang berinteraksi di dalamnya: antibodi, antigen, dan komplemen. Esensinya terletak pada kenyataan bahwa interaksi antara antibodi dan antigenhanya terjadi dengan adanya protein komplemen, yang teradsorpsi pada permukaan kompleks AG-AT yang terbentuk.
Agen itu sendiri, setelah penambahan komplemen, mengalami perubahan signifikan, yang menunjukkan kualitas reaksi. Ini bisa berupa lisis, hemolisis, imobilisasi, aksi bakterisida atau bakteriostatik.
Reaksi itu sendiri terjadi dalam dua fase:
- Pembentukan kompleks antigen-antibodi yang tidak terlihat oleh pemeriksa.
- Perubahan antigen di bawah aksi komplemen. Fase ini paling sering dapat dilacak dengan mata telanjang. Jika reaksi tidak terlihat secara visual, maka sistem indikator tambahan digunakan untuk mengidentifikasi perubahan.
Sistem indikator
Reaksi ini didasarkan pada fiksasi komplemen. Eritrosit ram yang dimurnikan dan serum hemolitik bebas komplemen ditambahkan ke tabung reaksi satu jam setelah RSC ditetapkan. Jika komplemen yang tidak terikat tetap berada di dalam tabung reaksi, maka komplemen tersebut akan bergabung dengan kompleks AG-AT yang terbentuk antara sel darah domba dan hemolisin, dan menyebabkan mereka larut. Ini berarti RSK negatif. Jika eritrosit tetap utuh, maka reaksinya positif.
Tes Hemaglutinasi (RGA)
Ada dua reaksi hemaglutinasi yang berbeda secara mendasar. Salah satunya adalah serologis, yang digunakan untuk menentukan golongan darah. Dalam hal ini, sel darah merah berinteraksi dengan antibodi.
Dan yang keduareaksi tidak berlaku untuk serologis, karena sel darah merah bereaksi dengan hemaglutinin yang dihasilkan oleh virus. Karena setiap patogen hanya bekerja pada eritrosit tertentu (ayam, domba, monyet), reaksi ini dapat dianggap sangat spesifik.
Anda dapat mengetahui apakah suatu reaksi positif atau negatif dengan lokasi sel darah di bagian bawah tabung reaksi. Jika polanya menyerupai payung terbalik, maka virus yang diinginkan ada dalam darah pasien. Dan jika semua eritrosit telah terbentuk seperti kolom koin, maka tidak ada patogen yang diinginkan.
Uji penghambatan hemaglutinasi (HITA)
Ini adalah reaksi yang sangat spesifik yang memungkinkan Anda untuk menentukan jenis, jenis virus, atau keberadaan antibodi spesifik dalam serum darah pasien.
Esensinya terletak pada fakta bahwa antibodi yang ditambahkan ke tabung reaksi dengan bahan uji mencegah pengendapan antigen pada eritrosit, sehingga menghentikan hemaglutinasi. Ini adalah tanda kualitatif adanya antigen spesifik dalam darah untuk virus spesifik yang dicari.
Reaksi imunofluoresensi (RIF)
Reaksi didasarkan pada kemampuan untuk mendeteksi kompleks AG-AT dengan mikroskop fluoresen setelah perlakuan mereka dengan pewarna fluorokrom. Metode ini mudah ditangani, tidak memerlukan isolasi kultur murni dan membutuhkan sedikit waktu. Ini sangat diperlukan untuk diagnosis cepat penyakit menular.
Dalam prakteknya, reaksi serologis ini dibagi menjadi dua jenis: langsung dan tidak langsung.
RIF langsung dihasilkan dariantigen, yang pra-perawatan dengan serum fluoresen. Dan yang tidak langsung adalah bahwa pertama obat diperlakukan dengan diagnostik konvensional yang mengandung antigen untuk antibodi yang diinginkan, dan kemudian serum luminescent, yang spesifik untuk protein kompleks AG-AT, diterapkan kembali, dan sel mikroba menjadi terlihat di bawah mikroskop.
