Hepatitis C adalah infeksi hati yang disebabkan oleh virus Flaviviridae HCV, yang terdiri dari satu atau lebih molekul RNA. Sebagai aturan, serangkaian tindakan diagnostik diambil untuk menetapkan hepatitis C pada pasien. PCR adalah analisis yang secara akurat mengkonfirmasi diagnosis. Seringkali kesimpulan diberikan oleh dokter ketika pasien sudah memiliki gejala awal penyakit.
Apa itu hepatitis C
Kerusakan hati oleh infeksi virus yang ditularkan melalui darah atau kontak seksual disebut hepatitis C. Agen penyebabnya adalah virus yang mengandung RNA dari agen infeksi non-seluler dari keluarga Flaviviridae. Infeksi dapat tinggal di dalam tubuh untuk waktu yang lama tanpa muncul dengan sendirinya. Oleh karena itu, hanya ketika mikroorganisme terdeteksi menggunakan tes darah menggunakan PCR RNA RNA, hepatitis C (sebagai diagnosis) dianggap dibenarkan.
Flavivirus tidak diproduksi dalam sel terisolasi yang tumbuh secara artifisial. Dalam proses reproduksi, agen infeksi menciptakan modifikasi imunologis yang berbeda. Faktor-faktor ini mencegah tubuh memberirespons perlindungan yang tepat, dan para ahli mengalami kesulitan mengembangkan vaksin yang efektif.
Virus ini ditularkan secara parenteral. Untuk infeksi, ia harus masuk dalam jumlah yang cukup langsung ke dalam aliran darah.
Tes yang dilakukan untuk hepatitis C
Patologi virus pada hati didiagnosis menggunakan tes laboratorium. Studi klinis hepatitis C dilakukan dengan mempelajari antigen asing dan berbahaya atau senyawa protein (antibodi) dalam biomaterial pasien, terutama dalam darah.
- Enzymatic immunoassay (ELISA). Metode ini didasarkan pada deteksi antibodi lgM dalam darah. Imunoglobulin dianggap yang terbesar dan merupakan pentamer. Ini memanifestasikan dirinya dalam respon protektif utama limfosit terhadap zat asing yang tidak diketahui.
- Radioimmunoassay (RIA) - penentuan kuantitatif imunoglobulin lgM menggunakan isotop radioaktif berlabel yodium.
- PCR hepatitis C - penentuan RNA virus dalam biomaterial (darah). Analisis ini secara andal mengkonfirmasi diagnosis.
Pengujian IgG tidak dapat diandalkan. Kehadirannya dalam serum darah dapat menunjukkan tidak hanya adanya flavivirus, tetapi juga infeksi lain di masa lalu yang memiliki patogen yang sama.
Yang menentukan analisis PCR
Polymerase chain reaction (PCR) didasarkan pada identifikasi daerah DNA spesifik untuk patogen tertentu dalam sampel bahan untuk penelitian (epitel, darah). Analisis memungkinkan untuk mengidentifikasi organisme terkecil (virus) patogen dengan mendeteksi RNA atau DNA mereka dalam bahan biologis.
Prosedur laboratorium untuk deteksi antibodi Hepatitis C PCR dilakukan dalam 3 tahap:
- Pilih. Biomaterial yang dipelajari dimurnikan dari pengotor dan DNA diperoleh dalam fase gerak kolom kromatografi.
- Amplifikasi. Analisis dilakukan di perangkat-thermostat cycler. Ini memanaskan dan mendinginkan tabung reaksi dengan siklus tertentu. Untuk satu studi, hingga 35 siklus dilakukan. Hasilnya adalah jumlah fragmen DNA yang cukup untuk mendeteksi, mengidentifikasi dan mengevaluasi patogen.
- Elektroforesis. Fragmen yang dihasilkan ditempatkan dalam gel dengan saturasi agarosa yang berbeda dan elektroforesis dilakukan. Elektroferogram yang dihasilkan dianalisis di komputer.
Tidak hanya studi PCR standar yang digunakan, tetapi juga analisis PCR Waktu Nyata. Ini adalah diagnosa waktu nyata. Metode ini memungkinkan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif, yang memungkinkan untuk mengidentifikasi pembentukan dan dinamika penyakit, serta meresepkan terapi yang bertujuan menghilangkan penyebab asal patologi. Real-time PCR juga digunakan untuk menentukan biakan murni agen infeksius (genotip).
Bagaimana tes reaksi berantai polimerase dilakukan
Untuk diagnosis, cairan biologis manusia apa pun dapat digunakan. Biomaterial untuk pengujian hepatitis C biasanya darah.
Pengambilan sampel untuk diagnostik dilakukan secara proseduralkantor. Untuk mengambil darah, gunakan tabung reaksi sekali pakai dengan zat yang menghambat pembekuan darah. Kegiatan yang berfokus pada pencegahan penyebaran agen infeksi membantu menghindari masuknya strain mikroorganisme lain dari luar.
Darah untuk PCR hepatitis C diambil di pagi hari dengan perut kosong. Sampel segera dikirim ke laboratorium. Diijinkan untuk menyimpan biomaterial pada suhu +4 hingga +8 derajat Celcius. Wadah diberi label dan dilengkapi dengan petunjuk arah. Hasil tes tersedia dalam 48 jam, terkadang lebih cepat.
Jenis PCR
Rentang penerapan reaksi berantai polimerase cukup luas. Infeksi menentukan menggunakan PCR hepatitis B, penyakit yang ditularkan oleh serangga penghisap darah, AIDS, TBC. Dalam onkologi, dengan menggunakan metode ini, sel tumor terdeteksi pada tahap awal.
Ada sekitar empat belas jenis analisis. Penggunaan satu atau jenis lain tergantung pada ruang lingkup dan hasil akhir dari analisis. Beberapa jenis PCR sangat diperlukan dimana hasilnya dibutuhkan dalam waktu 20 menit.
Untuk mendiagnosis hepatitis C, digunakan 3 jenis reaksi berantai polimerase:
- Penilaian kualitatif bisa positif, menunjukkan adanya infeksi dalam tubuh, atau negatif, menunjukkan tidak adanya flavivirus.
- Real-time PCR (analisis kuantitatif) - menentukan RNA kuantitatif patogen dalam IU/ml.
- Genotyping adalah analisis yang mengungkapkan jenis (genotipe) virus.
Untuk mengidentifikasi dan menentukan penyakit secara akurat, diikuti olehketiga jenis penelitian digunakan untuk meresepkan terapi yang optimal.
Analisis reaksi berantai polimerase kualitatif
Analisis adalah wajib bagi setiap orang yang memiliki ELISA yang telah mendeteksi antibodi terhadap HCV. PCR kualitatif untuk hepatitis C adalah tes kerentanan standar. Metode ini hanya ditujukan untuk deteksi, tidak ada penghitungan atau isolasi zat lain yang dilakukan.
Untuk mendeteksi antibodi, sistem uji khusus digunakan dengan ambang sensitivitas minimal 50 IU/ml. Jika antibodi terdeteksi, tes klarifikasi lainnya ditentukan. Jika hasilnya negatif, tidak ada pengujian lebih lanjut yang akan dilakukan.
Dalam beberapa kasus, hasil negatif palsu mungkin disebabkan oleh staf lab yang tidak kompeten atau reagen berkualitas buruk. Untuk asuransi, sebaiknya analisis ulang di tempat lain.
PCR Kuantitatif
Metode ini digunakan untuk mempelajari secara langsung jumlah flavivirus dalam satu siklus reaksi. Untuk pengukuran yang akurat, fragmen DNA yang digunakan untuk hibridisasi atau primer berlabel fluoresen digunakan. Ada pilihan deteksi ekonomis menggunakan pewarna SYBL Green. Pewarna terjepit ke dalam alur kecil di DNA dan berubah menjadi biru saat disinari dengan laser.
Konsentrasi ditentukan oleh penguat peralatan dalam ekivalen digital. Nilai mungkin sedikit berbeda antar lab dan oleh karena itu harus dibandingkan dengan nilai referensi.
PCR Kuantitatifhepatitis C membantu memilih dosis obat yang optimal dan menentukan durasi terapi. Frekuensi penelitian tergantung pada stadium penyakit, jenis genotipe dan pengobatan yang ditentukan.
Penetapan genotipe
Virus hepatitis C memiliki susunan genetik yang bervariasi. Banyak modifikasi membuat tidak mungkin membuat vaksin, dan juga mempersulit terapi. Sebanyak 11 genotipe dan 100 subtipe telah diidentifikasi dan dicatat. Di negara-negara bekas Uni Soviet, pada orang yang terinfeksi hepatitis C, PCR terutama mendeteksi genotipe 1b dan 3.
Di hadapan salah satu genotipe, sirosis atau kanker hati dapat bermain-main. Itulah mengapa sangat penting untuk mendeteksi virus tepat waktu.
Untuk beberapa pasien, obat-obatan tertentu yang dirancang untuk melawan HCV bersifat racun. Genotipe memungkinkan Anda untuk menentukan jenis protein dan meresepkan obat yang efektif.
Pada hasil tes pengetikan terdapat angka dengan huruf latin kecil yang menunjukkan genotipe virus. Jika HCV terdeteksi tetapi tidak diketik, ini berarti orang tersebut memiliki genotipe yang tidak khas untuk wilayah geografis tertentu.
Hasil analisis
Dokter berurusan dengan menguraikan hasil. Hanya data dari beberapa penelitian (bersama-sama dengan anamnesa dan pemeriksaan) yang dapat memberikan gambaran nyata secara keseluruhan tentang riwayat penyakit.
- Pada orang yang sehat, tes untuk reaksi kualitatif dalam biomaterial tidak mendeteksi apa pun. Jika nilai "terdeteksi" ditunjukkan, infeksi dikonfirmasi, dan pasienmembutuhkan diagnosis lebih lanjut diikuti dengan pengobatan.
- Penentuan jumlah agen infeksi memungkinkan untuk menilai viral load pada tubuh. Biasanya, PCR kuantitatif hepatitis C tidak mendeteksi patogen. Indikator hingga 810^5 dianggap sebagai beban rendah dan, dengan terapi yang tepat, menjamin hasil yang menguntungkan. Nilai yang lebih tinggi memerlukan pemeriksaan mendalam dan penentuan terapi jangka panjang, untuk hasil positif yang tidak dapat dijamin oleh siapa pun.
- Hasil genotipe positif menunjukkan genotipe mana yang dikenali. Hasil negatif menunjukkan tidak adanya flavivirus atau adanya genotipe yang tidak khas untuk wilayah ini.
Apa yang ditunjukkan oleh tes PCR positif
Setiap penyakit serius membutuhkan diagnosis yang komprehensif. PCR hepatitis C positif mengkonfirmasi diagnosis, tetapi prediksi hanya dapat dibuat setelah studi laboratorium dan instrumental tambahan.
Deteksi virus tidak memberikan gambaran patologi yang lengkap. Penting untuk mengidentifikasi jenis dan sifatnya, untuk menentukan bagaimana pengaruhnya terhadap hati dan organ lainnya. Deteksi dini HCV seringkali memiliki hasil terapi yang menguntungkan.
PCR negatif dengan ELISA positif
Saat mengamati gejala yang khas dari kerusakan hati, kemungkinan besar infeksi sudah masuk ke dalam tubuh. Karena itu, Anda harus menghubungi ahli hepatologi atau spesialis penyakit menular. Selama wawancara, spesialis akan mengumpulkan anamnesis dan meresepkan pemeriksaan yang diperlukan.
Jikahasil penelitian PCR hepatitis C negatif, dan enzim immunoassay positif, hal ini menunjukkan adanya antibodi terhadap flavivirus dalam darah. Ini biasanya terjadi ketika infeksi masuk ke dalam tubuh dalam jumlah kecil, sehingga sistem kekebalan mengatasinya sendiri. Namun orang tersebut masih dianggap terinfeksi dan wajib diperiksa setiap 6 bulan sekali. Jika dengan hasil tes seperti itu, seseorang ditolak pemeriksaan kesehatan gratis, lebih baik mengambil PCR dengan biaya untuk menjaga kesehatan, dan jika hasilnya positif, hubungi spesialis untuk diagnosis dan perawatan.
Kelebihan dan kekurangan metode
Saat menegakkan diagnosis hepatitis C, PCR memiliki beberapa keunggulan:
- Deteksi dini patogen.
- Definisi virus yang akurat.
- Efisiensi diagnostik.
- Tingkat kesalahan minimum.
- Sensitivitas tinggi.
Kekurangan metode:
- Biaya analisis yang tinggi. Tes ini membutuhkan peralatan mahal, reagen dan staf medis yang sangat berkualitas. Semua bersama-sama menambahkan hingga jumlah yang cukup besar.
- Persyaratan ketat untuk transportasi biomaterial.
Pengobatan radang hati
Analisis PCR untuk virus hepatitis C dianggap mendasar untuk diagnosis, tetapi tidak definitif. Agar terapi menjadi efektif, diperlukan sejumlah studi laboratorium dan instrumental tambahan. Setelah melewati semuatindakan diagnostik dokter meresepkan pengobatan:
- Diet 5 ditentukan.
- Alkohol sepenuhnya dikecualikan.
- Penerimaan bersama Interferon dan Ribavirin selama 25 hari.
- Kursus hepaprotectors "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- Dalam kasus khusus, digunakan plasmapheresis diskrit.
Obat yang diresepkan oleh ahli hepatologi digunakan secara teratur, tanpa mengubah dosis. Durasi minum obat ditentukan oleh dokter setelah lulus tes kontrol. Setelah menyelesaikan terapi, Anda harus mengunjungi dokter setiap enam bulan.
PCR-diagnostics memungkinkan untuk mengidentifikasi agen penyebab hepatitis C pada tahap awal. Ini berkontribusi pada efektivitas terapi dan pencegahan transisi penyakit ke bentuk berbahaya seperti sirosis dan karsinoma hepatoseluler.
