Metode kolorimetri - analisis berdasarkan perbandingan saturasi warna zat yang diselidiki dan diketahui. Hasil uji fisika dan kimia sangat bermanfaat bagi banyak cabang ilmu pengetahuan, tetapi sebagian besar penelitian digunakan dalam pengobatan.
Inti dari metode kolorimetri
Ada banyak jenis tes yang menentukan komposisi kimia zat. Beberapa dari mereka bersifat universal dan banyak digunakan di berbagai bidang, yang lain spesifik, dengan akurasi yang lebih tinggi. Metode kolorimetri bersifat universal.
Inti dari analisis terletak pada kenyataan bahwa saturasi warna larutan dengan konsentrasi yang tidak diketahui dibandingkan dengan warna larutan standar. Selama analisis, sebagai hasil interaksi komponen yang diselidiki dengan reagen tertentu, senyawa berwarna terbentuk. Setelah reaksi selesai, bayangan yang dihasilkan dibandingkan dengan warna larutan yang konsentrasinya sudah diketahui.
Diyakini bahwa pendiri kolorimetri adalah Robert Boyle. Dia menggunakan pemerasantanin untuk membedakan besi dari tembaga dalam larutan. Boyle-lah yang memperhatikan bahwa semakin besar konsentrasi besi dalam larutan, semakin kaya nada yang terakhir.
Klorimetri
Colorimetry adalah metode untuk menentukan jumlah suatu zat dalam larutan. Analisis ini didasarkan pada hukum Bouguer-Lambert-Beer: ketika berkas cahaya mengenai lapisan penyerap padat suatu zat, intensitasnya melemah.
Metode kolorimetri untuk menentukan konsentrasi suatu zat dapat menggunakan perbandingan visual atau perbandingan menggunakan alat khusus untuk mengukur intensitas warna. Perbandingan dilakukan secara langsung dan kompensasi.
- Lurus. Metode ini melibatkan membandingkan tingkat warna larutan uji pada kepadatan dan suhu tertentu dari cairan dengan larutan referensi. Saat menggunakan fotokolorimeter dan spektrofotometer, air suling digunakan sebagai larutan referensi. Perangkat mengukur intensitas arus, yang bergantung pada intensitas cahaya.
- Kompensasi. Metode ini didasarkan pada membawa warna sampel yang dipelajari ke referensi. Hasilnya dicapai dengan menambahkan pelarut atau menambah tinggi lapisan media yang diwarnai.
Penggunaan spektrofotometer, monokromator, dan instrumen presisi lainnya semakin menyederhanakan metode penelitian yang sudah sederhana dan memungkinkan Anda meningkatkan akurasi hasil. Perangkat ini mampu mengukur jumlah transmisi cahaya dan menentukan panjang gelombang.
Di mana analisis diterapkan
Metode analisis kolorimetri digunakan ketika komposisi kimia yang tepat diketahui, ada sampel referensi untuk perbandingan, dan suhu sampel uji dan referensi sama. Jika Anda perlu dengan cepat menentukan jumlah zat berwarna, tetapi jumlahnya sangat kecil sehingga tidak mungkin untuk menerapkan metode analisis.
Colorimetry banyak digunakan dalam pengobatan untuk penelitian biokimia klinis dan bidang lain:
- industri farmasi;
- industri makanan dan alkohol;
- agronomi (penentuan kualitas tanah).
Pro dan kontra
Metode kolorimetri, seperti metode lainnya, memiliki kelebihan dan kekurangan.
Kelebihannya antara lain sebagai berikut:
- kemudahan analisis, prosedur persiapan minimum;
- kemungkinan pengujian bahkan dengan sejumlah kecil bahan uji;
- tidak perlu peralatan yang mahal, meskipun perangkat modern yang tidak murah semakin banyak digunakan akhir-akhir ini. Tetapi mereka memberikan hasil yang paling akurat.
Kekurangan: akurasi analisis yang rendah dibandingkan dengan metode analisis.
Metode Biuret untuk penentuan protein
Protein dalam serum darah merupakan indikator yang mencerminkan keadaan homeostasis. Peningkatan konsentrasi senyawa makromolekul dalam darah disebut hiperproteinemia, kandungan rendah disebut hipoproteinemia.
Protein dalamserum darah memiliki komposisi, struktur, sifat yang berbeda, melakukan fungsi yang berbeda. Mereka dibagi menjadi enzim, hormon, imunoglobulin dan lain-lain. Semua kelompok protein memiliki sejumlah karakteristik umum, atas dasar metode yang telah dikembangkan untuk penentuan senyawa organik makromolekul dalam cairan biologis.
Dari semua metode dalam biokimia klinis, metode kolorimetri untuk menentukan protein paling sering digunakan. Mereka relatif murah, yang penting bagi organisasi anggaran. dan cukup sederhana. Yang paling umum adalah metode biuret. Inti dari metode ini: protein dalam lingkungan basa bereaksi dengan tembaga sulfat dan membentuk senyawa ungu. Kandungan protein dalam darah ditentukan oleh saturasi pewarnaan. Biomaterial untuk analisis diambil pada pagi hari dengan perut kosong.
Analisisnya sangat akurat, tetapi ada beberapa faktor yang mempengaruhi konsentrasi protein dalam darah:
- aktivitas fisik sesaat sebelum pengambilan sampel biomaterial;
- minggu terakhir kehamilan dan menyusui;
- penggunaan obat-obatan Corticotropin, Miscleron, Clofibrate meningkatkan kandungan protein dalam darah, dan penggunaan Pyrazinamide dan estrogen - untuk mengurangi konsentrasi;
- posisi tangan yang salah selama pengambilan sampel biomaterial.
Penentuan besi
Jumlah zat besi dalam darah merupakan salah satu indikator utama dalam diagnosis berbagai penyakit. Zat ini terkonsentrasi dalam hemoglobin, yang memastikan pengangkutan oksigen ke jaringan. Untukpenentuan besi dengan metode kolorimetri, paling sering, larutan bathofenantrolin (0,02%) digunakan sebagai reagen utama. Biomaterial - serum tanpa bekas hemolisis.
Inti dari metode ini: interaksi ion besi dan bathophenanthroline tersulfat membentuk kompleks berwarna, saturasinya ditentukan secara fotometrik. Untuk mendapatkan larutan yang jernih, perlu mengikuti aturan pengambilan sampel biomaterial, tetapi untuk menentukan densitas optik kompleks ligan besi secara akurat, besi dilepaskan dari hemoglobin menggunakan hidroksilamina dan deterjen (natrium dodesil sulfat). Hasil tes menentukan keberadaan dan tingkat patologi. Konsentrasi besi normal seharusnya:
- 14, 2 – 26.0 mol/L (pria);
- 10, 6- 21, 7 mol/L (wanita).
Defisiensi besi biasanya dikaitkan dengan kehilangan darah, asupan makanan yang tidak memadai, atau penyerapan yang buruk dari saluran pencernaan.
Tes kolesterol
Kolesterol adalah zat organik yang ditemukan di dinding sel banyak organisme, termasuk manusia. Hal ini diperlukan untuk produksi cholecalciferol dan hormon steroid. Tingkat kolesterol 3,37-5,2 mmol/L dianggap normal. Kandungan yang tinggi adalah salah satu penyebab utama aterosklerosis.
Metode kolorimetri untuk menentukan kolesterol memungkinkan Anda mengenali penyakit pembuluh darah pada tahap awal. Menurut hasil patoanatomi dalam hasil iskemia yang mematikan, konsentrasi alkohol lipofilik pada pasienadalah 6,5-7,8 mmol/L.
Prinsip metode kolorimetri adalah bahwa kolesterol dioksidasi oleh 3beta-hidroksi-steroid oksidoreduktase, melepaskan hidrogen peroksida, yang mengubah p-aminoatipirin menjadi senyawa berwarna. Kandungan kolesterol ditentukan oleh saturasi warnanya.
Saat melakukan tes pada anak, harus diperhitungkan bahwa konsentrasi kolesterol pada masa kanak-kanak tidak boleh melebihi 4,1 mmol / l.
Apa metode kolorimetri enzimatik?
Tes enzimatik didasarkan pada penggunaan reaksi oleh enzim dengan aktivitas tinggi. Mereka banyak digunakan dalam kimia analitik untuk menentukan berbagai zat - dari ion nitrat hingga makromolekul.
Metode enzimatik (enzimatik) bersifat spesifik, memungkinkan analisis zat tertentu dengan adanya zat lain yang komposisinya serupa. Metode paling umum berdasarkan penggunaan enzim - glukosa oksidase. Tes ini digunakan untuk menentukan konsentrasi glukosa dalam darah. Keakuratan tes memungkinkan untuk digunakan untuk menyesuaikan dosis agen hipoglikemik pada pasien dengan diabetes tipe 2.
Metode oksidan glukosa dianggap sebagai salah satu metode kuantitatif terbaik untuk menentukan glukosa. Baik darah (kapiler) dan serum dapat digunakan sebagai biomaterial, tetapi plasma lebih disukai karena memiliki kandungan hematokrit yang lebih rendah, yang berdampak negatif pada keakuratan hasil.
Metode kinetik fotometri terutama digunakan. Esensinya terletak pada kenyataan bahwarasio oksidase glukosa dan peroksidase yang ditetapkan, untuk waktu tertentu setelah dimulainya reaksi, laju pembentukan senyawa berwarna akan sepadan dengan tingkat glukosa dalam sampel. Keuntungan utama dari tes ini adalah bahwa hasilnya tidak terpengaruh oleh adanya senyawa pihak ketiga dalam sampel. Metode ini juga memiliki kelemahan - alat ukur mahal dari pabrikan Jerman atau Swedia diperlukan untuk pengujian.
Kesimpulan
Metode kolorimetri akurat dan mudah digunakan. Penggunaannya dalam pengobatan memungkinkan deteksi dini berbagai perubahan patologis dalam tubuh. Dengan diperkenalkannya teknologi baru, metode ini ditingkatkan dan menjadi semakin populer.
