Studi tentang bakteri sangat penting secara praktis bagi manusia. Sampai saat ini, sejumlah besar prokariota telah ditemukan, yang berbeda satu sama lain dalam patogenisitas, area distribusi, bentuk, ukuran, jumlah flagela, dan parameter lainnya. Untuk mempelajari galur ini secara mendetail, digunakan metode penelitian bakteriologis.
Apa metode untuk menganalisis sel bakteri?
Untuk menentukan apakah bakteri patogen, biakan diperiksa dengan berbagai cara. Diantaranya:
1. Metode bakterioskopik.
2. Metode bakteriologis.
3. Metode biologis.
Metode penelitian bakteriologis dan bakteriologis didasarkan langsung pada kerja dengan sel prokariotik, ketika analisis biologis diperlukan untuk mempelajari efek sel tersebut pada organisme hidup hewan percobaan. Menurut tingkat manifestasi dari tanda-tanda penyakit tertentu, ilmuwan dapat membuatkesimpulan tentang ada tidaknya bakteri patogen dalam sampel, serta memperbanyaknya secara alami di dalam tubuh hewan untuk dibiakkan dan digunakan dalam karya lain.
Metode penelitian bakteriologis berbeda dengan bakterioskopik. Yang pertama, kultur prokariota hidup yang disiapkan secara khusus digunakan untuk analisis, sedangkan yang kedua, pekerjaan dilakukan dengan sel-sel mati atau hidup pada slide kaca.
Tahapan metode penelitian bakteriologis. Mikrobiologi
Prinsip mempelajari sifat-sifat kultur bakteri dapat berguna baik untuk ahli mikrobiologi yang telah menetapkan tujuan mempelajari sel prokariotik, dan untuk teknisi laboratorium yang tugasnya menetapkan patogenisitas atau non-patogenisitas bakteri, dan kemudian diagnosa pasien.
Cara mempelajari bakteri dibagi menjadi tiga tahap:
1. Isolasi bakteri dari sampel asli.
2. Menabur bakteri dan menumbuhkan biakan murni, mempelajari sifat-sifatnya.
3. Studi rinci tentang sel bakteri.
Tahap pertama
Sampel, atau apusan, diambil dari permukaan bebas media atau dari pasien. Dengan demikian, kita mendapatkan "koktail" dari banyak jenis bakteri yang harus ditaburkan pada media nutrisi. Kadang-kadang menjadi mungkin untuk segera mengisolasi bakteri yang diperlukan, mengetahui fokus distribusi mereka di dalam tubuh.
Setelah dua atau tiga hari, koloni yang diinginkan dipilih danditaburkan pada media padat cawan Petri dengan bantuan loop steril. Banyak laboratorium bekerja dengan tabung reaksi, yang dapat berisi media nutrisi padat atau cair. Beginilah cara penelitian bakteriologis dalam mikrobiologi dilakukan.
Tahap kedua
Setelah mendapatkan koloni individu bakteri, analisis makro dan mikro langsung dilakukan. Semua parameter koloni diukur, warna dan bentuk masing-masing ditentukan. Hal ini tidak biasa untuk menghitung koloni pada cawan Petri dan kemudian di bahan awal. Hal ini penting dalam analisis bakteri patogen, yang jumlahnya tergantung pada derajat penyakit.
Metode penelitian bakteriologis, tahap kedua yang mempelajari koloni individu mikroorganisme, dapat dikaitkan dengan metode biologis untuk menganalisis bakteri. Tujuan lain dari bekerja pada tahap ini adalah untuk meningkatkan jumlah bahan sumber. Ini dapat dilakukan pada media nutrisi, atau Anda dapat melakukan percobaan in vivo pada organisme percobaan yang hidup. Bakteri patogen akan berkembang biak, dan sebagai hasilnya, darah akan mengandung jutaan sel prokariotik. Sangat mudah untuk menyiapkan bahan kerja bakteri yang diperlukan dari darah yang diambil.
Tahap ketiga
Bagian terpenting dari penelitian ini adalah penentuan sifat morfologi, biokimia, toksigenik dan antigenik dari kultur bakteri. Pekerjaan dilakukan dengan biakan yang telah dibersihkan sebelumnya pada media nutrisi, serta dengan preparat (sering diwarnai) di bawah mikroskop.
Setel kepemilikanbakteri patogen atau oportunistik ke satu atau kelompok sistematis lain, serta untuk menentukan resistensi mereka terhadap obat, memungkinkan metode penelitian bakteriologis. Tahap 3 - antibiotik, yaitu analisis perilaku sel bakteri dalam kondisi kandungan obat di lingkungan.
Studi tentang resistensi antibiotik dari suatu budaya sangat penting secara praktis ketika perlu untuk meresepkan obat yang diperlukan, dan yang paling penting, obat yang efektif untuk pasien tertentu. Di sinilah metode penelitian bakteriologis dapat membantu.
Apa itu media pertumbuhan?
Untuk perkembangan dan reproduksi, bakteri harus berada dalam media nutrisi yang telah disiapkan sebelumnya. Dengan konsistensi, mereka bisa cair atau padat, dan asalnya - nabati atau hewani.
Persyaratan media dasar:
1. Kemandulan.
2. Transparansi maksimal.
3. Indikator optimal keasaman, tekanan osmotik, aktivitas air dan nilai biologis lainnya.
Mendapatkan koloni terisolasi
1. Metode Drygalsky. Terdiri dari fakta bahwa apusan dengan berbagai jenis mikroorganisme diterapkan pada loop bakteri. Loop ini dilewatkan di sepanjang cawan Petri pertama dengan media nutrisi. Selanjutnya, tanpa mengubah loop, metode bahan residu dilakukan pada cawan Petri kedua dan ketiga. Jadi, pada sampel koloni terakhir, bakteri tidak akan terlalu padat, sehingga menyederhanakan kemampuan untuk menemukan yang diperlukan untuk bekerja.bakteri.
2. metode Koch. Ini menggunakan tabung reaksi dengan media nutrisi cair. Sebuah loop atau pipet dengan noda bakteri ditempatkan di sana, setelah itu isi tabung reaksi dituangkan ke piring khusus. Agar (atau gelatin) mengeras setelah beberapa waktu, dan mudah untuk menemukan koloni sel yang diinginkan dalam ketebalannya. Penting untuk mengencerkan campuran bakteri dalam tabung reaksi sebelum mulai bekerja agar konsentrasi mikroorganisme tidak terlalu tinggi.
Metode penelitian bakteriologis, yang tahapannya didasarkan pada isolasi kultur bakteri yang diinginkan, tidak dapat dilakukan tanpa kedua metode ini untuk menemukan koloni yang diisolasi.
Antibiogram
Secara visual, reaksi bakteri terhadap obat dapat dilihat dalam dua cara praktis:
1. Metode cakram kertas.
2. Perkembangbiakan bakteri dan antibiotik dalam medium cair.
Metode paper disc membutuhkan kultur mikroorganisme yang telah ditumbuhkan pada media nutrisi padat. Pada media seperti itu, letakkan beberapa lembar kertas bundar yang direndam dalam antibiotik. Jika obat berhasil mengatasi netralisasi sel bakteri, setelah perawatan tersebut akan ada area tanpa koloni. Jika reaksi terhadap antibiotik negatif, bakteri akan bertahan.
Dalam hal menggunakan media nutrisi cair, pertama-tama siapkan beberapa tabung reaksi dengan biakan bakteri dari pengenceran yang berbeda. Antibiotik ditambahkan ke tabung reaksi ini, dan proses interaksi antara zat dan mikroorganisme diamati pada siang hari. Akibatnya, antibiogram berkualitas tinggi diperoleh, yang menurutnya memungkinkan untukmenilai efektivitas obat untuk tanaman tertentu.
Tugas utama analisis
Berikut ini daftar tujuan dan tahapan metode penelitian bakteriologis.
1. Mendapatkan bahan awal yang akan digunakan untuk mengisolasi koloni bakteri. Ini bisa berupa apusan dari permukaan benda apa pun, selaput lendir atau rongga organ manusia, tes darah.
2. Budidaya kultur pada media nutrisi padat. Setelah 24-48 jam, koloni berbagai jenis bakteri dapat ditemukan pada cawan Petri. Kami memilih yang diinginkan sesuai dengan kriteria morfologi dan / atau biokimia dan melakukan pekerjaan lebih lanjut dengannya.
3. Perbanyakan budaya yang dihasilkan. Metode penelitian bakteriologis dapat didasarkan pada metode mekanis atau biologis untuk meningkatkan jumlah kultur bakteri. Dalam kasus pertama, pekerjaan dilakukan dengan media nutrisi padat atau cair, di mana bakteri berkembang biak dalam termostat dan membentuk koloni baru. Metode biologis membutuhkan kondisi alami untuk meningkatkan jumlah bakteri, sehingga di sini hewan percobaan terinfeksi mikroorganisme. Setelah beberapa hari, banyak prokariota dapat ditemukan dalam sampel darah atau apusan.
4. Bekerja dengan budaya murni. Untuk menentukan posisi sistematis bakteri, serta miliknya patogen, perlu dilakukan analisis sel secara menyeluruh sesuai dengan karakteristik morfologi dan biokimia. Saat mempelajari kelompok mikroorganisme patogen, penting untuk diketahui:seberapa efektif antibiotik.
Ini adalah karakteristik umum dari metode penelitian bakteriologis.
Fitur analisis
Aturan utama penelitian bakteriologis adalah sterilitas maksimum. Jika Anda bekerja dengan tabung reaksi, kultur dan subkultur bakteri harus dilakukan hanya di atas lampu spiritus yang dipanaskan.
Semua tahapan metode penelitian bakteriologis memerlukan penggunaan loop khusus atau pipet Pasteur. Kedua alat tersebut harus diolah terlebih dahulu dalam nyala lampu alkohol. Adapun pipet Pasteur, di sini, sebelum sterilisasi termal, perlu untuk mematahkan ujung pipet dengan pinset.
Teknik penyemaian bakteri juga memiliki ciri khas tersendiri. Pertama, ketika menginokulasi pada media padat, loop bakteri dilewatkan di atas permukaan agar. Loop, tentu saja, harus sudah memiliki sampel mikroorganisme di permukaan. Inokulasi ke dalam media kultur juga dilakukan, dalam hal ini loop atau pipet harus mencapai bagian bawah cawan Petri.
Saat bekerja dengan media cair, tabung reaksi digunakan. Di sini penting untuk memastikan bahwa cairan tidak menyentuh tepi gelas laboratorium atau sumbat, dan instrumen yang digunakan (pipet, loop) tidak menyentuh benda dan permukaan asing.
Pentingnya metode penelitian biologi
Analisis sampel bakteri memiliki aplikasi praktis. terutamametode penelitian bakteriologis dapat digunakan dalam pengobatan. Misalnya, perlu mempelajari mikroflora pasien untuk menegakkan diagnosis yang benar, serta mengembangkan pengobatan yang benar. Antibiogram membantu di sini, yang akan menunjukkan aktivitas obat melawan patogen.
Analisis bakteri digunakan di laboratorium untuk mendeteksi penyakit berbahaya seperti TBC, demam kambuh atau gonore. Ini juga digunakan untuk mempelajari komposisi bakteri pada amandel, rongga organ.
Metode penelitian bakteriologis dapat digunakan untuk menentukan pencemaran lingkungan. Menurut data komposisi kuantitatif dan kualitatif dari apusan dari permukaan suatu objek, tingkat populasi lingkungan ini oleh mikroorganisme ditentukan.
